中国·7790必发集团(股份有限公司)-官方网站

(ATCC)

【RRID】：CVCL_0320

【生长特性】：贴壁生长

【培养体系】：McCoy's 5a(CellCook cat:CM2002,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高级别)

【传代比例】：1:3传代（培养面积比）

【传代方式】：消化3-5分钟（用0.25%含EDTA胰酶）

【换液频率】：2~3天换液1次

【冻存配方】：McCoy's 5a+10%FBS+10%DMSO

【难度等级】：++

培养操作

 

 

【传代】：

✅：Step 1：当细胞汇合度达80%时传代；

✅：Step 2：将旧培养液吸出，使用0.25%含EDTA胰酶置于 37℃培养箱中消化3-5分钟（镜下观察细胞变圆、间隙增大），待细胞变圆收缩成流沙状态脱落后加入含血清培养基终止消化，将消化下来的细胞收集到离心管中；

✅：Step 3：1000rpm离心5分钟，重悬后接种至新培养瓶。

【冻存】：

✅：Step 1：细胞汇合度80%以上，活力状态较好时，可消化收集细胞沉淀进行冻存。

✅：Step 2：细胞沉淀用适量 4 °C 冻存液【McCoy's 5a(含10%胎牛血清)+10%DMSO】重悬， 一瓶 T25 细胞冻存2管（1ml/管），梯度降温（4℃ 30分钟→-20℃ 1小时→-80℃过夜→液氮长期保存）或使用程序降温盒降温后再转移至液氮中保存。冻存管需标记细胞名称、代次、冻存日期。若使用无血清细胞冻存液可省去程序降温步骤，直接转入-80℃保存，但仍建议在-80℃放置24小时后再转移至液氮。

无血清细胞冻存液使用方法与使用效果参考下文链接→《无血清冻存液PK常规冻存液》

【复苏】：

✅：Step 1：液氮取出的细胞放入干冰或液氮中转移到细胞房，提前准备好相关试剂耗材。

✅：Step 2：取出冻存管置于室温挥发液氮30s（如放入干冰转移则不需要挥发液氮），再转移到 37 °C 水浴中迅速解冻（1分钟内）。为了减少污染的可能性，保持冻存管瓶盖在水浴液面之上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻存管外壁。

✅：Step 3：将含细胞的冻存液转移到含 4-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，1000rpm离心5min去除DMSO ，重悬后接种（建议每个 T25 培养瓶添加 6-8ml 完全培养基）转移至培养瓶中静置培养，24小时后更换培养基（去除死亡细胞）。复苏后24小时内避免移动培养瓶，以促进贴壁。

培养要点

 

 

1

一般情况下细胞差不多长满时按1:3进行传代，生长周期为3-4天。

2

细胞传代时放培养箱参考消化3-5min（消化时长以具体消化情况为准），适当控制消化时间，避免消化不充分靠吹打强行让细胞脱落分散或消化过度造成细胞损伤。

3

本株细胞贴壁较慢，传代后需要静置贴壁1-2天，期间减少移动；细胞正常生长过程中会有少量漂浮细胞碎片和黑点，不需要过度换液。

4

细胞呈岛状成簇聚集生长，正常培养过程中会产生少量黑点和漂浮细胞碎片。

5

T25培养瓶长满通常可以冻存1管，10cm皿长满可以冻存2管；复苏初期可能会有大量漂浮细胞，可在48h后更换培养液时将漂浮细胞收集回原瓶。

 

应用领域

 

肠道肿瘤机制研究

作为结肠腺癌的代表性细胞株，HT29细胞常用于研究Wnt/β-catenin、PI3K/Akt等信号通路在结肠肿瘤发生、侵袭和转移中的作用机制

抗肿瘤药物筛选

可用于评估化疗药物（如5-氟尿嘧啶、奥沙利铂）、靶向药物及中药提取物对结肠癌细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用，是药物研发的重要体外模型

肠道炎症与屏障功能研究

HT29细胞可与Caco-2细胞共培养构建肠道屏障模型，用于研究炎症因子、益生菌代谢产物对肠道上皮屏障通透性的影响，助力炎症性肠病的治疗研究

 

细胞分化机制研究

在诱导剂作用下，HT29细胞可分化为具有功能的肠上皮细胞，常用于探索肠道细胞分化的调控网络，为干细胞分化研究提供参考

【CELLCOOK7790必发集团官网入口HT29细胞系部分引用文献】

●Yuan J, Li G, Zhong F, et al. SALL1 promotes proliferation and metastasis and activates phosphorylation of p65 and JUN in colorectal cancer cells[J]. Pathology-Research and Practice, 2023, 250: 154827.

●Zhu D, Yuan S, Chen C. Hedyotis diffusa–Sculellaria barbata (HD–SB) suppresses the progression of colorectal cancer cells via the hsa_circ_0039933/hsa-miR-204-5p/wnt11 axis[J]. Scientific Reports, 2023, 13(1): 13331.

●Yu Q. Comprehensive Exploration of SERPINA1 and Alternative Splicing Events within the Goblets in Colorectal Cancer: Implications for Mucin Secretion and Prognosis[D]. Carnegie Mellon University, 2024.

●Li J, Lv J, Chen Y, et al. Tumor suppressor circPDE4D inhibits the progression of colorectal cancer and regulates oxaliplatin chemoresistance[J]. Gene, 2023, 864: 147323.

●Bao M, Li S, Zhu Y, et al. CHL1 inhibits cell proliferation, migration and invasion by regulating the NFκB signaling pathway in colorectal cancer[J]. Experimental and Therapeutic Medicine, 2024, 27(4): 165.

本文所述方法仅供参考，具体操作需结合实验室条件优化。