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HT-22（小鼠海马神经元细胞）是从HT-4细胞系亚克隆而来的永生小鼠海马细胞系，亲代HT-4细胞系来源于带有温度敏感SV40 T抗原的小鼠神经元组织的永生化；该细胞系保留了海马神经元的部分特性，是研究神经退行性疾病和神经保护机制的理想模型。

细胞基本信息

左图：7790必发集团官网入口 HT22(200X)

右图：7790必发集团官网入口 HT22(100X）

【RRID】：CVCL_0321

【生长特性】：贴壁生长

【培养体系】：DMEM,high glucose(CellCook cat:CM2016,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高级别)

【传代比例】：1:3-1:4传代（培养面积比）

【传代方式】：消化2-3分钟（用0.25%含EDTA胰酶）

【换液频率】：2~3天换液1次

【冻存配方】：DMEM,high glucose+10%FBS+10%DMSO

【难度等级】：+

培养操作

【传代】：

✅：Step 1：当细胞汇合度达80%时传代；

✅：Step 2：将旧培养液吸出，使用0.25%含EDTA胰酶置于 37℃培养箱中消化2-3分钟（镜下观察细胞变圆、间隙增大），待细胞变圆收缩成流沙状态脱落后加入含血清培养基终止消化，将消化下来的细胞收集到离心管中；

✅：Step 3：1000rpm离心5分钟，重悬后接种至新培养瓶。

【冻存】：

✅：Step 1：细胞汇合度80%以上，活力状态较好时，可消化收集细胞沉淀进行冻存。

✅：Step 2：细胞沉淀用适量 4 °C 冻存液【DMEM,high glucose(含10%FBS)+10%DMSO】重悬，一瓶 T25 细胞冻存一管（1ml/管），梯度降温（4℃ 30分钟→-20℃ 1小时→-80℃过夜→液氮长期保存）或使用程序降温盒降温后再转移至液氮中保存。冻存管需标记细胞名称、代次、冻存日期。若使用无血清细胞冻存液可省去程序降温步骤，直接转入-80℃保存，但仍建议在-80℃放置24小时后再转移至液氮。

无血清细胞冻存液使用方法与使用效果参考下文链接→《无血清冻存液PK常规冻存液》

【复苏】：

✅：Step 1：液氮取出的细胞放入干冰或液氮中转移到细胞房，提前准备好相关试剂耗材。

✅：Step 2：取出冻存管置于室温挥发液氮30s（如放入干冰转移则不需要挥发液氮），再转移到 37 °C 水浴中迅速解冻（1分钟内）。为了减少污染的可能性，保持冻存管瓶盖在水浴液面之上。一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻存管外壁。

✅：Step 3：将含细胞的冻存液转移到含 4-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，1000rpm离心5min去除DMSO ，重悬后接种（建议每个 T25 培养瓶添加 6-8ml 完全培养基）转移至培养瓶中静置培养，24小时后更换培养基（去除死亡细胞）。复苏后24小时内避免移动培养瓶，以促进贴壁。

培养要点